常有剛剛接觸ELISA實驗的新手說操作復雜，步驟化很多，不易實驗。其實當我們掌握了其中的技巧與注意避免之后就會簡單很多。：
1. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。ELISA試劑盒
2. 所有液體組分使用前充分搖勻。
3. 實驗前，產品應保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正?，F象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
·評價的方法
    1.發(fā)質控物進行調查，這是目前國內外常見的形式，采用定期發(fā)放質控物至各實驗室，各實驗室在規(guī)定的日期進行檢驗，并將結果報至組織者(部、省臨檢中心)。組織者通過統(tǒng)計分析，再將評價結果寄回實驗室，使其了解工作質量，發(fā)現問題，提高質量。其缺點為由于各實驗室吃小灶或互相打修改結果而達不到真正評價作用。
2.現場調查，事先不通知，臨時派出人員到各實驗室，規(guī)定采用常規(guī)方法，檢測一組標本，進行評價。這種方法可以解決實際問題，進行現場指導，組織者常因人力、物力的原因而不能經常性進行。

·實驗記錄
1.所有實驗的原始資料均應存檔；
2.所有的記錄均應規(guī)范登記在冊；
3.原始登記表應記錄試劑來源、批號；
4.質控血清的來源及測定值并注明是否在控；

    抗體 在 ELISA檢測試劑盒 中應用的抗體可分為多克隆抗體（多抗）和單克隆抗體（單抗）。多抗取白免疫動物的抗血清，制備較簡單，但抗血清成分復雜，除含針對抗原（多個表位）的抗體外，還含有多種其他抗體，親和力和特異性相對要低于單抗，且制備周期長，批間差異較大。而單抗僅針對抗體的單一表位，親和力和特異性均較多抗高，且制備技術成熟，產量大，批間差異小，但結合位點的單一也正是其弱點之所在，在雙抗體夾心法中，如包被和指示抗體使用同一單抗，則由于結合位點的缺乏，容易造成假陰．性結果。在使用雙單抗一步法時，應注意抗原過剩時的“鉤狀效應"ELISA試劑盒
    2．抗原 在ELISA中應用的抗原要求有較高的特異性、親和力和純度。主要有3類，即自然抗原、人工合成抗原和基因重組抗原。自然抗原的純度不高，特異性不強；合成抗原一般為多肽片段，缺乏天然抗原所具有的立體結構表位，親和力不高，可能導致相應表位的抗體漏檢；基因重組抗原具有安全、特異性強、親和力高、產量大等特點，是一種比較理想的抗原，但其純化比較困難。
    3．包被 將免疫活性物質（抗原或抗體）結合于固相載體上的過程稱為包被。常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纖維薄膜等；常用的方法有吸附法、化學交聯法及親和素-生物素間接包被法，特別是后一方法，效率高，ELISA檢測試劑盒而且可用以包被不易吸附在固相上的各種免疫活性物質。具體做法是先將鏈霉親和素包被在固相載體上，然后使與生物素化的抗原或抗體與之結合。由于親和素與生物素之間的高親和力，抗原或抗體即間接結合在親和素包被的固相上.
    4．酶和底物 在 ELISA檢測試劑盒 中zui常用的酶為HRP和ALP。
（1）HRP：是一種糖蛋白，含糖量約18％，分子量為44kD，在蔬菜作物辣根中含量很高。HRP是一種復合酶，由主酶（酶蛋白）和輔基（亞鐵血紅素）結合形成一種卟啉蛋白質。主酶為五色糖蛋白，在275nm波長處有zui高吸收峰；輔基是深棕色的含鐵卟啉環(huán)，是酶的活性基團，在403nm波長處有zui高吸收峰。HRP的純度用純度值（reinhartzahl，RZ）表示，RZ＝A403nm／A275nm，即403nm的吸光度與280nm的吸光度之比，高純度HRP的RZ值應≥3．0。HRP質量的另一重要指標是酶活力，以單位（unit，U）表示。用于標記的HRP比活性應≥250U／mg。HRP的作用底物為H202，催化下列反應；ELISA試劑盒