原代細(xì)胞的分離培養(yǎng)：

原代培養(yǎng)即直接從有機(jī)體取下細(xì)胞、組織或器官，讓它們在體外維持與生長。原代培養(yǎng)的特點是細(xì)胞或組織剛離開機(jī)體，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內(nèi)的狀態(tài)，表現(xiàn)出來源組織或細(xì)胞的特性， 因此用于藥物實驗，尤其是藥物對細(xì)胞活動、結(jié)構(gòu)、代謝、有無毒性或殺傷作用等，是的工具。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法。

（一）組織塊培養(yǎng)法

許多實驗室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行原代培養(yǎng)，因為方法簡單，細(xì)胞也較容易生長。尤其是培養(yǎng)心肌，有時還可觀察到心肌組織塊搏動。細(xì)胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后， 即可進(jìn)行傳代。

1. 設(shè)備材料

培養(yǎng)箱、冰箱、超凈工作臺／無菌間、無菌吸管、離心管、酒精燈、試管架、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、消化液、基礎(chǔ)培養(yǎng)液、胎牛血清、Hanks 溶液、雙抗試液、剪刀、攝子、小燒杯。

2. 操作步驟

（1） 在無菌條件下，取待培養(yǎng)的組織適量，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污。

（2）用眼科剪將組織塊反復(fù)剪成0.5~ 1mm3的小塊。

（3）再用Hanks 溶液反復(fù)漂洗， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養(yǎng)液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養(yǎng)液。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養(yǎng)皿內(nèi)表面，吸去多余的培養(yǎng)液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養(yǎng)皿蓋，做好標(biāo)記， 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)。

（6） 2~4h 后，于超凈工作臺中，緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養(yǎng)液少量，以使組織塊浸沒在培養(yǎng)液中。

（7）輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱， 如無特殊情況，不必觀察。1~2 周后，可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長出，形成生長暈。

（9） 一般說來，若培養(yǎng)液無明顯改變， 1 周換液1 次即可。待細(xì)胞長滿整個培養(yǎng)皿內(nèi)表面，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

兔鼓膜上皮干細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

質(zhì)量檢測：廣譜角蛋白(PCK)免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基：兔鼓膜上皮干細(xì)胞培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%

產(chǎn)品貨期現(xiàn)貨，1周左右

運輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠白介素11(IL-11)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-11 ELISA Kit

大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA檢測試劑盒Rat1,3-βDglucosidaseELISAKit 96T/48T

人SAA/LDL復(fù)合物 免疫試劑盒 Human SAA/LDL Complex ELISA kit

英文名稱MousethrombieceptorELISAKit小鼠受體()規(guī)格：96T/48T

WoodyPla基礎(chǔ)培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑

rabbitplatelet-derivedgrowthfactor,PDGFELISA試劑盒兔子血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human colon cancer aigen (CCA) ELISA Kit 人結(jié)腸癌抗原(CCA)ELISA試劑盒

PorcinesolubleP-selectin,sP-SelectinELISAKit 豬可溶性P選擇素(sP-Selectin)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAlpha-GSTELISAKit大鼠αS轉(zhuǎn)移酶規(guī)格：48T/96T

血液結(jié)構(gòu)型神經(jīng)元合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性熒光定量檢測試劑盒20次

PlaGibberellicAcid,GAELISAKit植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔鼓膜上皮干細(xì)胞豬超氧化物歧化酶(SOD)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豬黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豬可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

操作方法：

組織塊直接培養(yǎng)法（原代細(xì)胞培養(yǎng)實驗）

材料與儀器

【動物】選擇大約一半足孕時間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個【實驗材料】每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個；3、50ml離心筒2個4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個5、1ml，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個6、細(xì)胞計數(shù)板1塊；7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；8、酒精燈1臺；

步驟

1) 胚胎的分離。適用哺乳動物(倉鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個胚胎轉(zhuǎn)移至一個小的無菌培養(yǎng)皿中，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在無菌狀態(tài)下，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無菌50ml的離心管中，該管內(nèi)按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中，重復(fù)步驟4和5。7)離心混合的細(xì)胞懸液，1200r/rain，5分鐘，棄上清。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞，按步驟7再次離心。9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止。