傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過(guò)度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

PK-1豬腎細(xì)胞系

細(xì)胞別稱　PK-1；豬腎細(xì)胞系

細(xì)胞規(guī)格;1x106cells/T25或1mL凍存管

支原體檢測(cè);無(wú)

培養(yǎng)基;DMEM+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)條件;氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)

發(fā)貨方式復(fù)蘇發(fā)貨（免運(yùn)輸費(fèi)用）/  凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

特別說(shuō)明以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書為主

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用?？筛鶕?jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過(guò)小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過(guò)程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

冰凍切片組織線粒體復(fù)合物I蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒

正常女性人體肝組織S9組分（5毫克/毫升）

pCAMBIA＋目的基因

細(xì)胞線粒體復(fù)合物I蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒

體液N-鏈接硫酸酯化糖胺多糖（N-sGAG）含量阿爾新藍(lán)（alcian blue）比色法定量檢測(cè)試劑盒

微粒體甘肽S轉(zhuǎn)移酶（GSH ST）活性酶動(dòng)力比色法定量檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I（CARNITINE PALMITOYL－TRANSFERASE I）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

THROMBIN-α-2-MACROGLOBULIN COMPLEX；TAM

組織氫過(guò)氧化物（HYDROPEROXIDE））活性硫酸鹽（THIOCYANATE）比色法定量檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞HSV（HERPES SIMPLX）病毒定性檢測(cè)試劑盒

CASPASE-2蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒

茶水氟元素比色法定量檢測(cè)試劑盒

免疫熒光細(xì)胞流式儀直接檢測(cè)試劑盒（含熒光一抗）

組織RSK1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）

細(xì)胞衰老特異性脂褐素靛酚原位染色試劑盒

中心體蛋白AZI1抗體

轉(zhuǎn)胺酶7抗體

溶質(zhì)載體家族22成員4抗體

MD-2蛋白抗體

細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶2單克隆抗體

白喉毒素B抗體

磷酸化c-mer原癌基因酪激酶抗體

CD26/DPP4抗體

PK-1豬腎細(xì)胞系血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子B