注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:中東呼吸綜合征科研PCR檢測試劑盒價格
英文名稱:Middle East Respiratory SyndromeCoronavirus(MERSCoV)RTPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
中東呼吸綜合征科研PCR檢測試劑盒價格原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
聚乙二醇3350/聚氧乙烯3350;聚氧化乙烯3350/PEG3350
聚乙烯醇/PVA1750±50類型500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,9002-89-5RT
聚乙烯醇縮丁醛/聚乙烯醇縮丁醛樹脂/聚酸甲基酯/PVB航空級500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,63148-65-2RT
1,3-丙二醇/1,3--二羥基丙烷/1,3-PropanediolAR,98%100毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,504-63-2RT
1,3-丁二醇/1,3-二羥基丁烷/(±)-1,3-丁二醇/間丁二醇/丁間二醇/1,3-ButanediolAR,99%250毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,107-88-0RT
1,4-丁二醇/1,4-二羥基丁烷/丁撐二醇/丁隔二醇/1,4-二羥丁烷/1.4-二羰基丁烷/伸丁二醇/BDOCP,98%500毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,110-63-4RT
2,3-丁二醇/丁二醇/2,3-二羥基丁烷/丁二仲醇/2,3-二羰基丁烷/2,3-丁烯乙二醇/2,3-ButanediolAR,98%250毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,513-85-9RT
1,2,4-丁三醇/1,2,4-三羥基丁烷/丁三醇/BTAR,96%25毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,3068-00-6RT
一縮二乙二醇/二甘醇/二乙二醇/雙甘醇/2,2'-氧代二乙醇/Diethylene glycolCP500毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,111-46-6RT
新戊二醇/季戊二醇/2,2-二甲基-1,3-丙二醇/二甲基三亞甲基二醇/二甲基丙二醇/NPGCP,96%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,126-30-7RT
一縮二丙二醇/雙丙甘醇/二丙二醇/二聚丙二醇/二羥基代二丙醚/丙二醇-(1,2)-醚/縮水二丙二醇/二(2-羥丙基)醚/丙醇醚/氧化二丙醇/雙丙二醇/二羥式代二丙醚雙(2-羥丙基)醚/1,1'-氧二-2-丙醇/β, β-二羥二正丙醚/DPGCP100毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,25265-71-8RT
1,6-己二醇/六亞甲基二醇/六亞甲基甘醇/1,6-乙烯乙二醇/六次甲基甘醇/1,6-HexanediolAR,98%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,629-11-8RT
1,2,6-己三醇/1,2,6-三羥基乙烷/1,2,6-HexanetriolAR,96%25毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,106-69-4RT
聚丙二醇2000/丙二醇聚醚2000/聚丙二醇2000/PPGCP250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,25322-69-4RT
中東呼吸綜合征科研PCR檢測試劑盒價格Europium(III) acetate hydrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
PULCHINENOSIDE B4 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
ALPHA-METHYL-L-VALINE HYDROCHLORIDE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Cimetidine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Kinetin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Ferrocenemethanol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Timosaponin BII 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Diethyl (2-oxopropyl)phosphonate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
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