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    底物消減文庫(kù)和肽段連接酶的底物特異性

    點(diǎn)擊次數(shù):1069次  更新時(shí)間:2015-06-25

    底物消減文庫(kù)
    這是一種改良的底物噬菌體技術(shù),用于區(qū)別兩種不同蛋白酶的底物特異性。首先的幾輪篩選使用*種蛋白酶篩選底物文庫(kù),將陽(yáng)性底物分離出來(lái)。之后,又用第二個(gè)蛋白酶底物對(duì)此陽(yáng)性底物進(jìn)行篩選,分離得到非底物序列。結(jié)果,得到的序列能夠被*個(gè)酶水解,但是不能夠被第二個(gè)蛋白酶水解。這種方法被用于區(qū)別纖溶酶原激活物t-PA和u—pA的特異性。盡管兩種蛋白酶都可以切割在P2和P1位點(diǎn)上的同一種GR序列,但是通過(guò)這種方法發(fā)現(xiàn)u-PA優(yōu)先切割P3位點(diǎn)的絲氨酸,而t-PA更偏向于切割體積較大的氨基酸,如酪氨酸和精氨酸。

    肽段連接酶的底物特異性
    多種底物噬菌體展示技術(shù)被用于闡明一個(gè)工程連接酶的底物特異性。一種其活性位點(diǎn)221位絲氨酸突變成半胱氨酸、225位脯氨酸突變成丙氨酸的枯草桿菌蛋白酶變異體,被發(fā)現(xiàn)可以將脂化的肽段連接到其他肽段或蛋白的N末端。通過(guò)將噬菌體展示的hGH前三個(gè)密碼子隨機(jī)化制備底物噬菌體文庫(kù),讓它與枯草桿菌蛋白酶變異體在生物素連接的肽脂(亞氨基生物素—KGAAPF-甘油—F—酰氨)存在的情況下一起反應(yīng),用抗生物素蛋白的瓊脂糖珠捕獲而分離連接后的底物噬菌體。這樣,文庫(kù)中那些含有連接反應(yīng)的良好親核試劑的文庫(kù)多肽就被選擇性地富集。以此方法得到的結(jié)果與使用合成底物得到的結(jié)果符合得很好,尤其是在P1,位點(diǎn)上。

    英文名稱 Homo sapiens (Human) 羧酸酯酶3(CES3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
    英文名稱 Homo sapiens (Human) 羧酸酯酶2(CES2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
    英文名稱 Rattus norvegicus (Rat) 羧酸酯酶1(CES1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
    英文名稱 Homo sapiens (Human) 羧酸酯酶1(CES1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
    英文名稱 General 羧甲基賴氨酸(CML)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
    英文名稱 Homo sapiens (Human) 羧基端結(jié)合蛋白2(CTBP2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
    蛋白英文名稱 Homo sapiens (Human) 髓樣前體細(xì)胞抑制因子2(MPIF2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
    英文名稱 Mus musculus (Mouse) 髓樣前體細(xì)胞抑制因子2(MPIF2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
    英文名稱 Homo sapiens (Human) 髓樣前體細(xì)胞抑制因子1(MPIF1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T

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