一、亮發(fā)光桿菌實(shí)驗(yàn)原理
由于莢膜與染料間的親和力弱，不易著色，通常采用負(fù)染色法染莢膜，即設(shè)法使菌體和背景著色而莢膜不著色，從而使莢膜在菌體周圍呈一透明圈。由于莢膜的含水量在90%以上，故染色時(shí)一般不加熱固定，以免莢膜皺縮變形。
二、實(shí)驗(yàn)方法
    推薦以下四種染色法，其中以濕墨水方法較簡便，并且適用于各種有莢膜的細(xì)菌。如用相差顯微鏡檢查則效果更佳。
1、負(fù)染色法：
（1）制片：取潔凈的載玻片一塊，加蒸餾水一滴，取少量菌體放入水滴中混勻并涂布。
（2）干燥：將涂片放在空氣中晾干或用電吹風(fēng)冷風(fēng)吹干。
（3）染色：在涂面上加復(fù)紅染色液染色2—3min。
（4）水洗：用水洗去復(fù)紅染液。
（5）干燥：將染色片放空氣中晾干或用電吹風(fēng)冷風(fēng)吹干。
（6）涂黑素：在染色涂面左邊加一小滴黑素，用一邊緣光滑的載玻片輕輕接觸黑素，使黑素沿玻片邊緣散開，然后向右一拖，使黑素在染色涂面上成為一薄層，并迅速風(fēng)干。
（7）鏡檢：先低倍鏡，再高倍鏡觀察。
結(jié)果：背影灰色，菌體紅色，莢膜無色透明。
 2、濕墨水法
（1）制菌液：加1滴墨水于潔凈的載玻片上，挑少量菌體與其充分混合均勻。
（2）加蓋玻片：放一清潔蓋玻片于混合液上，然后在蓋玻片上放一張濾紙，向下輕壓，吸去多余的菌液。
（3）鏡檢：先用低倍鏡、再用高倍鏡觀察。
結(jié)果：背景灰色，菌體較暗，在其周圍呈現(xiàn)一明亮的透明圈即為莢膜。
 3、干墨水法
（1）制菌液：加1滴6%葡萄糖液于潔凈載玻片一端，挑少量膠質(zhì)芽胞桿菌與其充分混合，再加1環(huán)墨水，充分混勻。
（2）制片：左手執(zhí)玻片，右手另拿一邊緣光滑的載玻片，將載玻片的一邊與菌液接觸，使菌液沿玻片接觸處散開，然后以30度角，迅速而均勻地將菌液拉向玻片的一端，使菌液鋪成一薄膜。
 （3）干燥：空氣中自然干燥。
 （4）固定：用甲醇浸沒涂片，固定1 min，立即傾去甲醇。
 （5）干燥：在酒精燈上方，用文火干燥。
 （6）染色：用甲基紫染1—2min。
 （7）水洗：用自來水輕洗，自然干燥。
 （8）鏡檢：先用低倍鏡再高倍鏡觀察。
 結(jié)果：背景灰色，菌體紫色，莢膜呈一清晰透明圈。
 4、Tyler法
（1）涂片：按常規(guī)法涂片，可多挑些菌體與水充分混合，并將粘稠的菌液盡量涂開，但涂布的面積不宜過大。
（2）干燥：在空氣中自然干燥。
（3）染色：用Tyler染色液染5—7min。
（4）脫色：用20%CuSO4水溶液洗去結(jié)晶紫，脫色要適度（沖洗2遍）。用吸水紙吸干，并立即加1—2滴香柏油于涂片處，以防止CuSO4結(jié)晶的形成。
（5）鏡檢：先用低倍鏡再用高倍鏡觀察。觀察完畢后注意用二甲苯擦去鏡頭上的香柏油。
 結(jié)果：背景藍(lán)紫色，菌體紫色，莢膜無色或淺紫色。
 三、亮發(fā)光桿菌注意事項(xiàng)
1、加蓋玻片時(shí)不可有氣泡，否則會(huì)影響觀察。
2、應(yīng)用干墨水法時(shí)，涂片要放在火焰較高處并用文火干燥，不可使玻片發(fā)熱。
3、在采用Tyler法染色時(shí)，標(biāo)本經(jīng)染色后不可用水洗，必須用20%CuSO4沖洗。
9005-00-9     Polyoxyl 10 Stearyl Ether    聚氧乙烯硬脂酸酯標(biāo)準(zhǔn)品    1g
9004-67-5     Methylcellulose (AS)    甲基纖維素標(biāo)準(zhǔn)品    1g
9004-57-3    Ethylcellulose    乙基纖維素標(biāo)準(zhǔn)品    1g
9004-34-6        微晶纖維素標(biāo)準(zhǔn)品    1g
9004-34-6    Powdered Cellulose (AS)    纖維素粉標(biāo)準(zhǔn)品    1g
9003-27-4     Polyisobutylene    聚異丁烯標(biāo)準(zhǔn)品    1g
9003-20-7     Polyvinyl Acetate     聚乙酸乙烯酯標(biāo)準(zhǔn)品    1g
9003-20-7     Polyvinyl Acetate Dispersion    聚乙烯乙酸酯分散體標(biāo)準(zhǔn)品    1g
90028-20-9        狹葉紫錐菊提取物標(biāo)準(zhǔn)品    1g
9001-73-4     Papain    木瓜酶標(biāo)準(zhǔn)品    1g
87-99-0     Xylitol     木糖醇標(biāo)準(zhǔn)品    1g
亮發(fā)光桿菌