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    雞外周血NK細(xì)胞的組織塊直接培養(yǎng)法

    點(diǎn)擊次數(shù):427  更新時(shí)間:2024-02-28
    組織塊直接培養(yǎng)法(原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn))
    材料與儀器
    【動(dòng)物】選擇大約一半足孕時(shí)間的胚胎,10-13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞,成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個(gè)
    【實(shí)驗(yàn)材料】每組的超凈臺(tái)中有以下物品:
    1、50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS)1瓶;100ml 0.25%瓶;PBS(-)1瓶
    2、100ml滅菌燒杯2個(gè)
    3、50ml離心筒2個(gè)
    4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
    5、1ml,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
    6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊
    7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把
    8、酒精燈1臺(tái)
    步驟:
    1) 胚胎的分離。適用哺乳動(dòng)物(倉鼠、小鼠和大鼠)。
    2)將1-2個(gè)胚胎轉(zhuǎn)移至一個(gè)小的無菌培養(yǎng)皿中,用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎,用PBS漂洗。
    3)在無菌狀態(tài)下,將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25%的無菌,用攪拌棒輕輕攪動(dòng)。
    4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動(dòng)15分鐘。
    5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降,將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無菌50ml的離心管中,該管內(nèi)按照每10ml上清加入lml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。
    6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中,重復(fù)步驟4和5。
    7)離心混合的細(xì)胞懸液,1200r/rain,5分鐘,棄上清。
    8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞,按步驟7再次離心。
    9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止。
     
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