PCR檢測試劑盒利用離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜提取豬偽狂犬病毒DNA，以此為模板，在特異引物和TaqDNA聚合酶的作用下，經(jīng)高溫變性，低溫退火、中溫延伸的循環(huán)，使特異的DNA的片段拷貝數(shù)放大一倍。經(jīng)過30次循環(huán)，使擴(kuò)增的DNA的片段放大數(shù)百萬倍。將擴(kuò)增的DNA的片段進(jìn)行電泳，經(jīng)染色后在紫外燈照射下，肉眼可見DNA的片段的擴(kuò)增帶，進(jìn)而判斷待檢樣本中是否含有豬偽狂犬病毒。
PCR檢測試劑盒具有下列特點：
1.根據(jù)DHBV的保守序列設(shè)計的引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
2.靈敏度比常規(guī)PCR高2-3個數(shù)量級，可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
3.即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
4.一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5.足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
PCR檢測試劑盒的檢測步驟：
1.核酸提取
樣品進(jìn)行適當(dāng)處理后，可采用核酸提取試劑盒，該試劑盒可用于對樣本中病毒RNA的提取，請按照說明書進(jìn)行操作。也可選擇其他合適的商品化產(chǎn)品。
2.擴(kuò)增試劑的準(zhǔn)備
將各試劑按照用量加入無菌離心管中，充分混勻，短暫離心后在PCR反應(yīng)管中分別加入18μL混合液。
3.加樣
將制備好的樣本，陰性對照，陽性對照各取2μL分別加入對應(yīng)反應(yīng)管中，加完后蓋緊PCR反應(yīng)管蓋，置于PCR儀上。
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