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    耐藥細(xì)胞的特性和操作要點有哪些

    點擊次數(shù):1573  更新時間:2020-12-28
       耐藥細(xì)胞的特性:
      1)細(xì)胞來源于人正??谇火つそM織。
      2)細(xì)胞鑒定:Vimentin免疫熒光染色為陽性。
      3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
      4)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
      5)細(xì)胞生長方式:不規(guī)則細(xì)胞,長梭形,貼壁培養(yǎng)。
     
      耐藥細(xì)胞的操作要點:
      1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
     
      2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
     
      3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
     
      4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
     
      5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
     
      6)產(chǎn)品僅用于科研觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
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